Milieu de culture: Gélose Lactose au Térgitol 7 et au TTC (Selon AFNOR)

La microbiologie des eaux

Fiche technique : 

Milieu de culture: Gélose Lactose au Térgitol 7 et au TTC (Selon AFNOR)

Domaine d'utilisation:

 La gélose lactosée au tergitol 7 et au TTC (selon AFNOR) permet d'effectuer la recherche et le dénombrement des coliformes et des coliformes thermotolérants dans les eaux potables, les eaux de piscines et les eaux de baignades par la méthode de membrane filtrante.

Milieu de culture de base:

          Composition du milieu : 

                          Formule en grammes par litre d'eau distillée

Peptone pancréatique de viande	10.0 g
Extrait de viande	5.0 g
Extrait autolytique	6.0 g
Lactose	20.0 g
Tergitol 7	0.1 g
Bleu de bromothymol	0.05 g
Agar agar bactériologique	10.0 g

           Contrôle qualité 

Le milieu de base déshydraté se présente sous forme d'une poudre beige à verdâtre, fluide et homogène.

          Mode de préparation 

• Mettre en suspension 51.1 g de milieu déshydraté dans 1 litre d'eau distillée,
• porter à ébullition lentement sur un agitateur chauffant jusqu'à dissolution complète.
• Répartir à raison de 100 mL par flacon (ou un volume supérieur selon le besoin d'utilisation).
• Stériliser à l'autoclave  à 121 + ou - 3°C pendant 15 minutes.

          Mode de conservation 

Le milieu de base (sans TTC) peut être conservé en flacon au maximum 3 mois à 4 + ou - 2°C à l'obscurité.

Supplément TTC 12.5 mg

          Composition 

                            Un flacon de supplément sous forme lyophilisé est constitué de :

Triphényltétrazolium (chlorure)

12.5 g

           Mode de reconstitution de Supplément 

• Reprendre le lyophilisat en y ajoutant aseptiquement 5 mL d'eau distillée stérile (si nécessaire  1 mL en plus pour le rinçage).
• Agiter le flacon plusieurs fois de façon à assurer une complète dissolution et d'une manière à éviter la formation de mousse.

        Mode de conservation du Supplément TTC 12.5 mg reconstitue 

Une fois reconstitué le produit peut être conservé à 4 + ou - 2 °C pendant 1 mois à l'obscurité.

Milieu complet (prêt à l'emploi) 

          Préparation du milieu de culture complet 

• Faire  fondre le milieu de culture de base jusqu'à dissolution complète.
• Refroidir et maintenir le milieu à 47 + ou - 2°C,
• ajouter stérilement 1 mL de supplément TTC (12.5 mg) reconstitué par flacon de 100 mL de milieu de culture de base,
• homogénéiser parfaitement et en évitant la formation de mousse.
• Couler en boites de pétri stériles de 55 mm de diamétre (environ 8 à 10 mL de milieu par boite).
• Laisser solidifier sur une surface plane et froide.

           Contrôle qualité analytique

• Milieu préparer complet se présente sous forme d'une gélose bleu-vert.
• le pH final, du milieu de culture prêt à l'emploi dot être de 7.2 + ou - 0.2 à 25°C.
• Réponse culturale typique après 24 à 48 heures d'incubation à 36 + ou - 2°C :

                   - Escherichia coli, Enterobacter aerogenes : bonne croissance avec production d'acide.

                   - Staphylococcus aureus : croissance inhibée.

             Mode de conservation du milieu de culture complet 

Le milieu de culture (complet avec le TTC) prêt à l'emploi (coulé en boites de Pétri ( diamètre 55 mm)), peut être conservé au maximum 8 jours à 4 + ou - 2°C à l'obscurité.

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