TP de biochimie : Réaction d'identification de quelques Aminoacides

Travaux pratiques de biochimie Réaction d'identification de quelques Aminoacides

Fiche technique du TP

But du TP:

- Propriétés des Aminoacides et réaction biuret

- Mise en évidence de quelques Aminoacides 

Principe du TP:

1- Réaction de la ninhydrine:

Réaction coloré nitrique fondamentale pour la mise en évidence et la détermination des aminoacides (570nm), en excés à chaud produit une désamination, et proportionnelle à la quantité d'AA présente dans le milieu réactionnel.

Matériels et réactifs nécessaire:

Solution de glycine 10 g/l, solution d"ose (glu,fruc) 10g/l, sulution de la ninhydrine 2g/l, bain marie bouillant, tube à essai, pipette graduée de 2 ml, pipette pasteur à pointe coupée.

2- recherche au tryptophane:

Le tryptophane est oxydé en milieu acide.

Matériels et réactifs nécessaire:

- Solution de tryptophane 10g/l, solution de formaldéhyde 5% dans H2O D d'acide acétique ; H2SO4 concentré, tube à essai, pipette de 1ml, pipette pasteur à pointe coupée.

3- réaction des Aminoacides osomatique:

L'acide nirique HNO3 réagit sur les cycles aromatiques formant des dérivés mitrés, cette réaction s'accompagne de la formation d'un précipite lorsque l'on opère sur une proteine contenant ce type d'acides aminés.

Matériels et réactifs nécessaire:

Solution d'ovalbumine à 5g/l solution d'acides aminés aroùatique à 30g/l (tyrosine, tryptophane, phénylalanine), solution d'un acide aminé aromatique (glycine = témoin), acide nitrique concentré (HNO3); 5 tube à essai, bec beneri, pppettes de 1ml.

4- Réaction du Biuret:

La mise en évidence des liaisons peptidiques, réaction qui caractérise la liaison peptidique, s'applique à l'analyse qualitative et quantitative des peptides à condition que ces derniers confortent ou aminoacides aussi moins,entrainant la formation d'un complexe entre l'ion cuivrique et la liaison peptidique.

Matériels et réactifs nécessaire:

-Solution de glycine "témoin" g/l, solution d'ovalbumine g/l,

-Solution de sulfate de cuivre CuSO4 à 1%, lessive de soude, pipette graduée de 2ml, pipette graduée de 1ml, 2 tubes à essai.

1) réaction de la ninhydrine:

Manipulation:

Tube 1: 1ml de glycine + 5 gouttes de ninhydrine

Tube 2: 1ml de glucose + 5 gouttes de ninhydrine

Agitation + bain marie 2 minutes

     - le chauffage fournie une énergie et provoque une accélération de la réaction biochimique.
     - la ninhydrine joue ainsi le rôle d'une enzyme qui provoque la désamination au niveau des AA aliphatique d'après la réaction suivante.

Réaction:

Observation : donne une coloration poupre de ruhema

Conclusion: le réaction à la ninhydrine est spécifique aux acides aminés.

2) recherche des aminoacides aromatiques:
       a- recherche de la Trp (tryptophane) par l'acide sulfurique H2SO4:

La tryptophane est oxydé en mileu acide, et pour cela on utilise le formole ou l'acide acétique.

Observation: 
T2. précipité de la Try = Coloration brunatre et formation d'un anneau jaune marron flottant.

T1. pas de réaction = Coloration transparente.

Conclusion:
 La try est une acide aminée aromatique (Cycle benzène) c'est ce qui lui permet de réagir avec le formol (réaction spécifique).

b) la liaison peptidique réaction de biuret:

Réaction: 

Rq. radicaux libres porteurs de cycle.

Observation:
T1. Coloration violet.
T2. incolore.

Conclusion 

T1 contient l'ovalbumine (protéine) donc la présence de plusieurs AA liés entre eux avec des liaisons peptidique.
Donc la réaction de biuret identifie la présence des liaisons peptidique.

C) Recherche des Aminoacides aromatiques par l'acide nitrique HNO3

Observation :

T1: glycine == incolore par l'AA
T2: Tyr == contient des AA aromatiques == Coloration jaunâtre
T3: Try == coloration orange == présence d'AA aromatique
T: prot-oval == coloration jaune == présence d'AA aromatique

Conclusion:

C'ovalbumine contient un AA aromatique qui est Tyrosine (même coloration dans le T2 et T4).

Conclusion générale:

- La réaction à la ninhydrine est spécifique au AA.
- La réaction à l'acide sulfurique est spécifie aux acides aminés aromatiques
- La réaction de Biuret identifie la présence des liaisons peptidiques.
- L'ovalbumine qui est une protéine contient des AA aromatiques. 

Bonne chance

Posted in: Biochimie